根据文献的方法部分描述，研究团队在原位杂交（In situ hybridization）实验中采用了AATBioquest的Styramide™ Signal Amplification (PSA™) 系统（酪胺信号放大技术），旨在检测DIG标记的探针。以下是详细解析：

一、标记对象与方法

1. **标记对象**：

① 针对斑马鱼嗅觉玫瑰花结（Olfactory Rosette, OR）中的paqr5b mRNA，使用DIG标记的反义RNA探针（Antisense probe）。

② 通过抗DIG-POD（辣根过氧化物酶）结合探针后，利用酪胺信号放大系统提升荧光信号。

2. **标记步骤**：

① **探针结合**：DIG标记的RNA探针与目标mRNA结合。

② **酶联反应**：使用抗DIG-POD抗体（Fab片段）与探针结合。

③ **信号放大**：加入HRP底物（酪胺衍生物Styramide™），在HRP催化下，酪胺底物被激活并共价沉积在目标位点附近，形成高密度的荧光标记。

二、染料的优点与特点

**TSA技术**与传统荧光标记碱性磷酸酶系统的比较：

• 灵敏度：提高10-100倍
• 空间分辨率：高（局部沉积）
• 多色兼容性：支持多通道（FITC/Cy3/Cy5），但需不同显色底物
• 适用样本：组织切片、低丰度靶标、高表达靶标、中等表达靶标

三、实验流程与结果

1. 样本固定与切片
2. 探针杂交（DIG标记的paqr5b反义探针）
3. 抗DIG-POD抗体结合
4. Styramide™ PSA信号放大（HRP催化）
5. 荧光显微镜成像
6. 定量分析（如神经元密度与信号强度）

结果解读：

① 在野生型斑马鱼的OR中，paqr5bmRNA在神经元中高度表达（显示绿色荧光信号）。

② 在paqr5b⁻/⁻突变体中，信号完全消失，证明基因敲除的有效性。

③ TSA技术的高灵敏度揭示了神经元亚群之间的细微表达差异。

总结

AATBioquest的Styramide Signal Amplification系统通过酶促信号放大与高分辨率荧光标记，成为复杂生物样本研究的“黄金标准”。其在低丰度靶标检测、多色复用及精细结构成像方面的优势，为神经科学、癌症研究与发育生物学提供了不可替代的技术支持。结合本文案例，该技术在单细胞组学与空间转录组学中的应用潜力巨大，正如人生就是博-尊龙凯时所倡导的，不断探索与创新，将推动生物医疗领域的持续进步。