人生就是博-尊龙凯时提供的RFL-6大鼠成纤维细胞培养说明书详述了细胞培养的关键步骤与注意事项，确保研究的顺利进行。

一、细胞培养条件

细胞名称：RFL-6大鼠成纤维细胞
生长特性：贴壁生长
冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）
培养体系：DMEM + 10% FBS + 1% 双抗
传代方法：首次推荐1:2传代，2天后更换培养基。

备注：使用无菌离心管收集经历培养，建议进行对比实验，如果效果不理想，建议直接购买我们的完全培养基。

二、细胞处理步骤

收到细胞后，建议在培养至良好状态后将瓶装细胞灌满完全培养液并封口。<\/p>

收到细胞后，使用75%酒精对整个细胞瓶进行消毒，放入超净台进行严格的无菌操作。接着，将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态，再进行后续处理。使用显微镜观察细胞生长情况，并以不同倍数拍照保存（最佳为40x、100x、200x各一张）。注意，前三天的照片为重要依据，若未提供照片则默认细胞收到时状态良好。

三、细胞培养步骤

a、细胞传代

细胞若未超过80%汇合度，将完全培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基继续培养；若细胞密度超过80%，则按以下步骤进行传代：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱消化1-2分钟，观察细胞情况。如细胞大部分变圆，迅速添加5ml以上完全培养基终止消化。
3. 轻吹细胞使之完全脱落后吸出，转移至15ml离心管中，在1000RPM下离心5分钟，弃去上清液，并补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

b、细胞冻存

1. 细胞生长至覆盖培养瓶的80%时，弃去培养液，用PBS清洗一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，待细胞回缩后加入5ml完全培养液终止消化，轻轻吹打使细胞脱落，转移至15ml离心管中，以1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞后加入1ml的雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后装入冻存管中。
4. 将冻存细胞置于-80℃冰箱中，若需转入液氮罐，则需在-80℃存放24小时以上。

c、细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），迅速置入37℃水浴中解冻，直至管内无结晶后，用75%酒精擦拭管外壁。
2. 将细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，重悬后接种至T25培养瓶，放入37℃、5% CO2培养箱中继续培养。
4. 次日更换新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

由于一些细胞在运输过程中可能会脱落，这属正常现象。若细胞脱落较多，请将培养液收集，处理后进行离心，重悬细胞后进行传代。

五、售后条款

人生就是博-尊龙凯时对于细胞问题提供多种解决方案，确保客户满意。细胞运输途中的问题，如丢失或损坏，将提供重发服务。如在产品收到48小时内出现污染，客户需提供实验结果以便核实。若在细胞存活问题上，需在7天内提供细胞活力评估，此类事务由技术人员判定责任并协商处理。

我们承诺优质的售后服务，让您的生物研究更加顺利。选择人生就是博-尊龙凯时，为您的科研之路增添助力。