人生就是博-尊龙凯时提供的大鼠肺泡巨噬细胞NR8383培养指南，旨在协助研究人员有效培养和管理细胞。以下是详细的细胞培养条件、处理步骤及相关注意事项。

一、细胞培养条件

细胞名称： 大鼠肺泡巨噬细胞NR8383
生长特性： 贴壁与悬浮混合生长
冻存条件： 无血清冻存液（货号：C7001）
培养体系： F12K培养基+20% FBS+1% P/S
传代方法： 建议首次传代比例为1:2，传代间隔2天换液。请注意：悬浮细胞应离心收集，贴壁细胞则需遵循适当处理步骤。

二、细胞收到后的处理

收到细胞后，建议根据以下步骤处理：将细胞培养至良好状态后，使用完全培养液灌满细胞瓶并封好瓶口，这是运输细胞的最佳方法。收到细胞时，请用75%酒精对整个细胞瓶消毒后，在超净台内进行无菌操作。将细胞置于37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以确保细胞稳定。显微镜下观察细胞生长情况，并拍照记录（各倍数最好拍摄40x、100x、200x），前三天的照片将作为售后依据。如未提供照片，则默认细胞状态良好。

三、细胞培养步骤

（a）细胞传代

对于贴壁细胞传代，建议如下： 1. 去除培养上清，用不含钙镁的PBS洗涤1-2次。 2. 加入0.25%胰蛋白酶消化液，大约1-2ml，置于37℃培养箱消化1-2分钟，再观察消化状态。 3. 若细胞已大部分变圆并开始脱落，迅速回到操作台，轻拍培养瓶后加入5ml完全培养基终止消化。 4. 将细胞悬液转移至15ml离心管，1000RPM离心5分钟，去除上清，加1-2ml完全培养基重悬。 5. 按照1:2的比例分瓶传代，补充新的培养基至5-8ml/瓶，然后置于37℃、5% CO2培养箱中继续培养。 对于悬浮细胞的传代，可以选择以下方法： - 方法一：收集细胞，1000RPM离心8-10分钟，去上清后，添加1-2ml培养液，轻轻吹匀后，按1:2比例分入新的培养瓶中。 - 方法二：可采取半数换液，将剩余液体悬起，按1:2比例分瓶。

（b）细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%时，弃去培养液并用PBS洗涤一次。 2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，观察细胞情况，细胞回缩后加入5ml完全培养基终止反应。 3. 将细胞悬液转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，去上清后加入1ml无血清冻存液（货号：C7001），混匀并转移至冻存管。 4. 冻存细胞可直接置于-80℃冰箱，若后期需转移至液氮罐，请在-80℃存放24小时以上后再进行转移。

（c）细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管，注意佩戴防护面具，迅速置于37℃水浴中解冻，直至无结晶。 2. 用75%酒精擦拭冻存管外壁后，将细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。 3. 去上清后，再次用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，并放入37℃、5% CO2培养箱中继续培养，第二天更换为新鲜完全培养基。

四、注意事项

运输过程中，部分细胞可能因贴壁不牢而脱落，此为正常现象。如细胞掉落较多，请将培养液收集至离心管，1000RPM离心5分钟后，对沉淀进行处理。切记在进行细胞操作时，需遵循无菌规则，以确保细胞状态稳定。

五、售后条款

1. 人生就是博-尊龙凯时 客户如遇到细胞问题，可申请重发的情况包括： - 运输过程中细胞丢失或瓶身破损。 - 收到后48小时内提供污染证据。 - 细胞复苏后状态不佳，需提供清晰的细胞状态照片。 2. 不予重发的情况包括： - 客户自身操作不当导致污染或细胞状态不佳。 - 使用非推荐培养体系导致细胞状态不佳。 - 收到后未及时告知问题。

在细胞培养和实验过程中，遵循上述步骤和注意事项，能有效保障细胞健康与实验成功。感谢您选择人生就是博-尊龙凯时，祝您的研究顺利进行！