RNA模板的制备

RNA提取方法概述

在生物医药领域，常用的RNA提取方法包括传统的酚-氯仿抽提法和柱式抽提法。本文将对这两种方法的操作流程进行详细介绍。

酚-氯仿抽提法

以Vazyme产品RNAisolater Total RNA Extraction Reagent（Vazyme#R401）为例，所需材料包括氯仿、异丙醇、75%乙醇（使用DEPC水配置）和DEPC水。需要注意的是，过多的样本量可能导致样本裂解不充分，从而影响产物的纯度。

根据不同类型的样本，1ml RNAisolater能够充分裂解的最大样本量如下：

1. 贴壁细胞：首先弃去培养液，使用PBS洗涤一次。然后，每10cm²培养面积的细胞加入1-3ml RNAisolater，确保其覆盖到细胞表面。接着，用移液器轻轻吹打细胞。

2. 悬浮细胞：离心收集细胞后，使用PBS洗涤一次。每5×10⁶-10⁷个细胞加入1ml RNAisolater，轻轻吹打至无明显颗粒，静置在冰上5分钟。

3. 动物组织：对于经过液氮研磨的组织，需将磨成粉末的样本迅速转移至离心管，加入RNAisolater裂解液并静置，待样品完全融化后继续轻轻吹打至裂解液透明，随后进行离心。

柱式抽提法

同样以Vazyme的FastPure™ Cell/Tissue Total RNA Isolation Mini Kit（Vazyme#RC101/RC111）为例，所需材料包括β-巯基乙醇、无水乙醇、RNase-free枪头等。

对于贴壁细胞，无需消化，可直接使用加入β-巯基乙醇的Buffer RL1进行裂解；如选择用胰酶消化，离心后收集细胞，再加入Buffer RL1，每2-5×10⁶个细胞添加500μl Buffer RL1，并用移液器充分混合。

对于悬浮细胞，直接离心收集后加入Buffer RL1，方法相同；如果提取结束后未立即进行下一步处理，可将样品置于-70℃保存。

相关产品及推荐

中科腾宇（广州）科技技术有限公司专注于为生物医药领域提供高品质的产品与技术服务，致力于发展为基因治疗和细胞治疗领域的生物科技企业。我们将始终如一地为您提供最新的专业资讯与完善的物流服务。凭借着强大的技术支持和广泛的合作伙伴网络，我们非常荣幸能够向国内从事生物科研的专家和研究者推荐先进的高科技产品。

我们致力于成为您在生命科学领域的可靠合作伙伴，无论是产品需求还是技术支持，我们的团队都将竭诚为您服务。人生就是博-尊龙凯时，欢迎您前来咨询与合作。